Espectrometria de Massa - MALDI-TOF

(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization – Time Of Flight – Mass Spectrometry)

Descrição

A Voyager DE PRO ™ Biospectrometry Workstation é um espectrómetro de massa com analisador de tempo vôo e ionização/desorção a laser assistida por matriz (MALDI). O dispositivo é equipado com laser de azoto (337nm) e o analisador TOF permite trabalhar em modo linear e refletor.

A gama de massa teórica "ilimitada" do TOF e a suave ionização, característica de MALDI permite que esta técnica seja uma das melhores escolhas para a análise de macromoléculas com alta sensibilidade e resolução, incluindo peptídeos, proteínas de alto peso molecular, oligonucleotides , polissacarídeos e polímeros sintéticos. No modo reflector, as moléculas de massa inferior a 10 kDa podem ser analisadas (peptídeos, moléculas orgânicas, complexos, polímeros e proteínas de baixo peso molecular), com uma resolução de ~ 7000 (ou > 7.000 para m/z <6 kDa). O modo linear permite a análise de moléculas de alto peso molecular, com uma resolução de > 2.000 para pequenas proteínas (m/z < 20 kDa) e ~50 para grandes proteínas (m/z ~100 kDa).

Equipamento

MALDI-TOF-MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization – Time Of Flight – Mass Spectrometry) marca Applied Biosystems, modelo Voyager DE-PRO Biospectrometry Workstation.

Amostra

Numa análise MALDI-TOF-MS as amostras são previamente dissolvidas e dispersas numa matriz (geralmente um ácido orgânico), colocadas numa placa MALDI e, após evaporação do solvente,  é introduzida na fonte MALDI onde os cristais amostra-matriz são irradiados por um feixe laser.

A concentração da amostra a ser entregue depende do tipo de analito,  tendo já em linha de conta as diluições necessárias com a matriz.  Assim:

1-  Para polímeros, compostos orgânicos e complexos a quantidade de amostra necessária é de cerca de 1 mg. A amostra será dissolvida no solvente indicado pelo  requisitante, de preferência que seja miscível com o solvente da matriz.

2- Para péptidos e proteínas em solução, a concentração depende do peso molecular. Para proteínas com massa inferior a 10 kDa são necessários cerca de 10 a 20 pmol/μL. Para proteínas com massas superiores a 10 KDa a quantidade a ser entregue deve ser de 100 a 200 pmol/ μL. As proteínas (ou a mistura de péptidos) podem também ser enviadas liofilizadas.

3- As amostras de proteínas provenientes de electroforese, separadas em poliacrilamida e tingida com azul de Coomassie ou com prata (prata compatível com espectrometria de massa), podem ser entregues no próprio gel hidratado. No caso das bandas separadas, a banda/mancha proteica deve ser recortada com o mínimo de gel possível e colocada num tubo eppendorf recoberto com água mili-Q. É fundamental enviar um scanner ou fotocópia da imagem do gel juntamente com as amostras.

Reagentes compatíveis com a MS tipo MALDI-TOF

Utilizar sempre reagentes com grau de pureza HPLC e água mili-Q

A) Os compostos que não interferem com o MALDI-TOF são: ác. trifluoracético, ác. fórmico, beta-mercaptoetanol, DTT, solventes orgânicos voláteis, HCl, NH₄OH, ác. acético.

B) Compostos de concentrações inferiores a 50 mM não interferem com a espectrometria de massa: HEPES, MOPS, Tris, NH₄Oac, octilglucósido.

C) A evitar os seguintes compostos: glicerol, azida sódica, DMSO, SDS, fosfatos, NaCl, 2M ureia, 2M Guanidina.

 Preços das Análises (€)

Nota: 1) Os valores não incluem IVA.

Pedido de Análises

O pedido de análise deverá ser peenchido e assinado pelo responsável da entidade que solicita a análise (Download do formulário do pedido). As análises são realizadas por ordem de entrada do pedido no Laboratório de Análises. No caso de amostras para desenvolvimento de método e no caso de elevado número de amostras, o tempo de resposta é acordado com a entidade solicitadora.

O equipamento é unicamente operado pelo técnico responsável. Se solicitado pelo cliente, é permitido o contacto directo com o equipamento onde se faculta uma breve descrição técnica/teórica acompanhada de demosntração prática de funcionamento.

Aquando do pedido de análises a entidade solicitadora deverá contactar directamente a técnica responsável pelo equipamento para esclarecimento de todas as questões que envolvem a análise.

Download do formulário do pedido

O formulário do pedido deverá ser enviado para Drª Luz Fernandes:

luz.fernandes@dq.fct.unl.pt 

Laboratório de Análises

REQUIMTE - Rede de Química e Tecnologia

Departamento Química / Faculdade de Ciências e Tecnologia

 Universidade Nova de Lisboa

2829-516 Caparica

Portugal
Tel: 351 212947805  (ext: 10993)

Fax:351 212948550

Entrega e recepção de amostras

1- As amostras devem estar bem identificadas, de forma a que durante a manipulação não se apague a identificação e deverão ser entregues bem acondicionadas.

2- As amostras provenientes de electroforese devem vir acompanhadas de um scanner ou fotocópia da imagem do gel.

3- A entrega dos resultados será feita exclusivamente por e-mail em formato pdf, a enviar simultâneamente para o requerente e para o responsável. No caso de reclamações, estas deverão ser efectuadas no prazo de 15 dias úteis.

4- O remanescente das amostras será guardado no laboratório durante 15 dias úteis após a realização da análise, passado o qual serão eliminadas.